Comparação da microbiota vaginal entre mulheres Portuguesas saudáveis ou com vaginose bacteriana, através de tipagem molecular

Abstract

A Vaginose Bacteriana (VB) é uma doença comum em mulheres em idade reprodutiva e, em termos microbiológicos, é caraterizada pela substituição de espécies de Lactobacillus, que são predominantes na microflora vaginal normal, por bactérias anaeróbias que proliferam rapidamente, particularmente Gardnerella vaginalis. Embora não fatal, a VB aumenta o fator de risco de aquisição de várias doenças sexualmente transmissíveis e está envolvida em abortos e partos prematuros. O objetivo deste trabalho foi estudar a estrutura das comunidades microbianas presentes na microflora vaginal de mulheres portuguesas saudáveis e com VB. Para isso, o DNA obtido a partir de amostras vaginais recolhidas de mulheres VB-negativas (21 amostras) e VB-positivas (17 amostras) foi submetido a amplificação por PCR e posterior análise por DGGE. Os microrganismos pertencentes aos grupos Bacteria, Bifidobacterium, Lactobacillus spp. e G. vaginalis foram detetados por PCR com primers específicos para a amplificação do gene que codifica o 16S rRNA. Os perfis de DGGE obtidos para cada amostra foram comparados e a similaridade entre perfis determinada através do cálculo dos índices de similaridade. Obtiveram-se diferentes perfis de DGGE em amostras VB-positivas e VB-negativas com primers específicos para todos os grupos estudados. Os resultados obtidos mostram que existem alterações na estrutura da comunidade microbiana de amostras VB- positivas e negativas e que estas são detetadas por PCR-DGGE. Os perfis de DGGE obtidos a partir de amostras de mulheres VB-positivas são mais diversos comparativamente aos perfis obtidos a partir de amostras de mulheres saudáveis, refletindo assim a maior diversidade das comunidades bacterianas em mulheres VB-positivas. A análise do padrão das bandas eletroforéticas obtido para Bacteria revela uma diversidade intrínseca dentro dos dois grupos estudados: as semelhanças nos perfis de DGGE bacterianos variam entre 9-71% e 13-100% para amostras VB-positivas e VB-negativas, respetivamente. G. vaginalis não foi detetada em nenhuma das amostras de mulheres saudáveis, por outro lado, foi detetada em todas as amostras VB-positivas. A análise das comunidades de Lactobacillus revelou uma maior diversidade em amostras de mulheres VB-negativas comparativamente a amostras de mulheres VB-positivas, confirmando a associação de Lactobacillus à microflora vaginal saudável. O conhecimento mais aprofundado sobre a influência da VB na microflora vaginal, poderá ser obtido recorrendo à sequenciação dos genes que codificam para o 16S rRNA, permitindo assim a identificação dos microrganismos presentes em mulheres VB-negativas e VB- positivas.

Bacterial Vaginosis (BV) is a common disease in women of reproductive age and, from a microbiology perspective is characterized by the substitution of Lactobacillus species, which are predominant in the normal vaginal microbiota, by rapidly proliferating anaerobic bacteria, particularly Gardnerella vaginalis. Although not fatal, BV increases the risk factor for the acquisition of several sexually transmitted diseases and it is related to in abortions and premature births. The aim of this study was to study the structure of vaginal microbiota communities structure in the vaginal microbiota of healthy and BV-positive Portuguese women. For this propose, DNA obtained from vaginal samples of 21 BV-negative and 17 BV-positive women was submitted to PCR amplification followed by amplicons analysis DGGE. Total bacterial communities were amplified using general 16S rRNA gene primers. Group-specific primers were also used targeting Lactobacillus, Bifidobacterium and G. vaginalis. DGGE profiles were compared and similarity between DGGE profiles was determined by calculating similarity indices. Different DGGE profiles could be obtained for BV-positive and BV-negative samples and this was verified for all primers sets utilized, suggesting that alteration of microbial community structure of BV-positive and -negative samples could be detected by PCR-DGGE. DGGE profiles obtained from samples of BV-positive women were more diverse that the ones from healthy women (as determined by a higher number of DGGE bands). The analysis of the standard electrophoretic bands for Bacteria reveals an intrinsic diversity even within the two groups studied: similarities in bacterial DGGE profiles vary between 9- 71% and 13-100% in BV-positive and BV-negative samples, respectively. G. vaginalis was not detected in any of the healthy women samples. The analysis of Lactobacillus communities revealed a higher diversity in BV-negative women than in BV-positive, which confirms the association of Lactobacillus to healthy vaginal microbial communities. A more thoroughly comparison between the microbiota of BV-positive and BVnegative women is necessary for getting more insights on the BV influence on vaginal microbiota, which can be done by 16S rRNA gene sequencing of microbial communities.